Kit de purificação de RNA viral “Viral RNA Extraction from Respiratory Specimens”

O Mini Kit EzGene DNA / RNA Extraction Kit para 250 amostras fornece um método fácil e confiável para isolar o RNA viral total de aspirados ou lavagens de plasma, soro, nasofaringe ou orofaringe, swabs nasofaríngeos ou orofaríngeos, lavagem bronquioalveolar, aspirados traqueais e escarro.

Este procedimento foi testado para isolar ácidos nucleicos de COVID-19, Hepatite A, Hepatite C e HIV. O RNA isolado pode ser usado para PCR, qRT-PCR e outras aplicações subsequentes.

A extração pode ser feita manualmente ou automatizada

Para amostras respiratórias, incluindo: aspirados ou lavagens nasofaríngeas ou orofaríngeas, zaragatoas nasofaríngeas ou orofaríngeas, lavagem broncoalveolar, aspirados traqueais e escarro. As amostras de zaragatoa só devem ser coletadas em zaragatoas com ponta sintética com veios de alumínio ou plástico. Cotonetes com alginato de cálcio ou pontas de algodão com hastes de madeira não são aceitáveis

Também para amostras de soro, plasma ou outras amostras de fluidos corporais.

Conteúdo do Kit VR6568-02

    Catálogo VR6568-02
    Preps 250
    Tampão LYE 90 mL
    Proteinase K (25 mg / mL) 4 mL
    Tampão de lavagem de RNA * 50 mL
    Buffer RB * 90 mL
    Solução 550 µL
    DdH2O tratado com DEPC 15 mL
    Mini coluna com tubos coletores 250


Protocolo (manual)

Protocolo de isolamento de RNA viral

O protocolo é desenvolvido para processar amostras de 50-300 μL.

Pipete 20 µL de Proteinase K, 2 µL de Solução L e 300 µL de Tampão LYE em um tubo de 1,5 ml. Calcule o número de amostras a serem processadas e faça uma Master Mix de Proteinase K, Solução L e LYE Buffer.

Pipete 300 µL de aspirados ou lavagens nasofaríngeas ou orofaríngeas, zaragatoas nasofaríngeas ou orofaríngeas, lavagem broncoalveolar, aspirados traqueais ou plasma, soro, no tubo de 1,5 mL da Etapa 1. Misture bem com um vórtice de pulso por 10 segundos. Incubar em temperatura ambiente por 10 minutos para lisar células e vírus.

Adicione 600 µL de isopropanol e misture bem usando um vórtice de pulso por 5 segundos. Gire brevemente para recolher a gota da tampa.

Nota: Manter a proporção de (amostra + tampão LYE): isopropanol = 1: 1

Transfira 600 µL da amostra da etapa 3 para uma coluna de RNA e centrifugue a 10.000 rpm por 30 segundos. Elimine cuidadosamente o fluxo para um recipiente de resíduos, pipetando e coloque a coluna de volta na coleção. Transfira a amostra restante para a coluna e centrifugue a 10.000 rpm por 30 segundos. Descarte o fluxo e substitua a coluna no tubo de coleta. Nota: Ao transferir a coluna / tubos de coleta, segure sempre a borda superior do tubo de coleta, e não a coluna, para evitar uma possível queda do tubo de coleta.

Adicione 500 µL de tampão RB à coluna e centrifugue a 10.000 rm por 30 segundos. Descarte o fluxo contínuo. Coloque a coluna de volta no tubo de coleta.

Adicione 500 µL de RNA Wash Buffer à coluna e centrifugue a 10.000 rpm por 30 segundos. Descarte o fluxo contínuo. Coloque a coluna de volta no tubo de coleta.

Centrifugue a coluna vazia a 12.000 rpm por 2 min. A remoção do etanol residual é fundamental para a eluição ideal.

Transfira a coluna de RNA para um tubo de 5 ml sem RNase, adicione 35-50 µL de água tratada com DEPC à coluna e centrifugue a 10.000 rpm por 30 segundos. O RNA viral está no fluido de fluxo contínuo.

Opcional: adicione o eluente novamente à coluna para uma segunda eluição.

Nota: A primeira eluição normalmente produz 70% do RNA, enquanto a segunda eluição produz outros 20-30% do RNA ligado à coluna.

Nota: O RNA purificado deve ser colocado no gelo para aplicação a jusante ou armazenado a -20 ° C.